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八十年代集單克隆抗體、熒光化學、激光、計算機等高技術(shù)發(fā)展起來的一種先進儀器，已廣泛應(yīng)用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規(guī)工作。其中檢測人白細胞表面標志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷，對淋巴細胞群和亞群進行精確分類，還能分離純化某一群或亞群細胞。

活細胞免疫熒光技術(shù)是用于FCM檢測的標本準備，染色后也能在熒光顯微鏡下進行觀察，在某些實驗條件下，活細胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優(yōu)于滴片固定的常規(guī)間接免疫熒光的結(jié)果。

活細胞表面保留有較完整的抗原或受體，先用特異性鼠源性單克隆抗體與細胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合，再用熒光標記的第二抗體結(jié)合，根據(jù)所測定的熒光強度和陽性百分率即可知相應(yīng)抗原的密度和分布。

1.各種特異性單克隆抗體。

2.熒光標記的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗體，滅活正常兔血清(見附錄)。

3.10％ FCS RPMI 1640, DPBS、洗滌液、固定液。

4.流式細胞管、EP管、移液器、離心機、熒光顯微鏡等。

制備活性高的細胞懸液(培養(yǎng)細胞系、外周血單個核細胞、胸腺細胞、脾細胞等均可用于本法)

5×106～１×107/mL
取40μL細胞懸液加入預(yù)先有特異性McAb(5～50μL)的小玻璃管或塑料離心管，再加50μL1∶20(用DPBS稀釋)滅活正常兔血清

（4℃ 30min）

用洗滌液洗滌2次，每次加洗滌液2mL左右

1000rpm×5min
棄上清，加入50μL工作濃度的羊抗鼠(或兔抗鼠)熒光標記物，充分振搖

（4℃ 30min）

用洗滌液洗滌2次，每次加液2mL左右

1000rpm×5min
加適量固定液(如為FCM制備標本，一般加入1mL固定液，如制片后在熒光顯微鏡下觀察，視細胞濃度加入100～500μL固定液)

FCM檢測或制片后熒光顯微鏡下觀察

(標本在試管中可保存5～7天)

附錄:

1. DPBS (×10, 貯存液)

NaCl：80g

KCl：2g  蒸餾水加至1000mL

Na2HPO4：11.5g  臨用時用蒸餾水1∶10稀釋

KH2PO4：2g

2.洗滌液

DPBS：900mL

FCS：50mL (終濃度5％)

4％NaN3：50mL (終濃度0.2％)

3.固定液

DPBS：1000mL

葡萄糖：20g (終濃度2％)

甲醛：10mL

NaN3：0.2g (終濃度0.02％)