耗材常說的無熱原、無核酶、無內毒素究竟是什么意思
不知道大家平時有沒有經常采購耗材的需求,如果是經常采購實驗室耗材的人可能會發(fā)現,各個廠家可能都會給產品標榜上無酶無熱原、無內毒素的標簽,
特別是涉及到一些細胞生物學和分析生物學的耗材更是如此,例如常見的15ml和50ml離心管、細胞培養(yǎng)瓶、細胞培養(yǎng)皿、細胞培養(yǎng)板、凍存管、PCR板等
等產品。而有這些描述的產品通??赡芤矔绕胀ǖ耐惍a品貴一些。那么這些說法到底是什么意思,又對我們的實驗有什么影響呢?我們
平時在進行采購的時候應該如何進行選擇,這里就給大家簡單介紹下。
定義
1
熱原
熱原指注入機體后能引起人體體溫異常升高的致熱物質。廣義的熱原包括細菌性熱原、內源性高分子熱原、內源性低分子熱原及化學熱原等。這里所指的
“熱原”,主要是指細菌性熱原,是某些微生物的代謝產物、細菌尸體及內毒素。
2
酶
酶大家在初中就學過,作為一種生物催化劑,酶能夠高效催化我們生物體內各種生化反應的進行。然而大部分產品所說的無酶,實際上更準確點說并不是指
所有酶,而是指核酸酶,很多廠家也寫成DNase-free和RNase-free,都是代表的一個意思。核酸酶能夠分解核酸分子,有專一性降解DNA或RNA,也有專
一性較低可同時作用于DNA和RNA分子的酶。
3
內毒素
內毒素為革蘭氏陰性菌的菌體中存在的毒性物質的總稱。是多種革蘭氏陰性菌的細胞壁成分,由菌體裂解后釋出的毒素,成分為脂多糖。一般認為內毒素為熱
原的一種,藥品生產的時候通??梢越邮埽翰淮嬖趦榷舅貏t不存在熱原,因此在生產的時候可能只進行內毒素檢測而不進行熱原檢測。
影響
熱原和內毒素能夠刺激機體,引起機體發(fā)熱。在制藥、臨床等領域,為了人的安全,通常對熱原和內毒素的量有所要求。在中國藥典中對于熱原和內毒素的檢
測也都給到了明確的方法。而核酸酶在涉及到分子學實驗室的時候,因為其具有分解DNA的作用,很可能使目標分子片段被降解,例如PCR實驗中,如果收到
核酸酶的污染有可能無CT值,從而產生假陽性的結果。所以像吸頭、PCR相關的耗材通常都是無核酸酶的。
關于熱原和內毒素的檢測
下面簡單介紹下藥典中對熱原和內毒素檢測的內容。
1
熱原檢測
中國藥典1142通則中描述了使用家兔法進行熱原檢測。使用健康合格的家兔,將一定劑量的供試品,靜脈注入家兔體內,在規(guī)定時間內,觀察家兔體溫升高的
情況。與供試品接觸的試驗用器皿應無菌、無熱原。去除熱原通常釆用干熱滅菌法(250℃、30分鐘以上),也可用其他適宜的方法。如果受試的家兔在一定
時間內的體溫升高到一定標準,則認為供試品的熱原檢查不符合規(guī)定。
2
內毒素檢測
內毒素檢測以前國際上都使用鱟試劑法進行檢測。具體方法有凝膠法和光度測定法,鱟試劑可以與細菌內毒素發(fā)生凝集反應,產生凝膠或者發(fā)生濁度變化,通過測
定這種變化測定內毒素含量。鱟試劑是從海洋節(jié)肢動物鱟的血液中提取制成的一種試劑,因此鱟在世界范圍內遭到大量捕殺,在我國也成為了國家二級保護動物。
目前FDA已經批準了重組C因子法,替代了鱟試劑。我國藥典的指導原則中也已提到該法。
如何進行選擇
其實了解了這幾個概念之后如何進行選擇也就不難了。主要還是根據自己的需求來選擇。通常無酶和熱原的耗材較為常見,無內毒素的產品相對較少。如果實驗
本身對于這些沒有較高要求,其實可以選用普通耗材,舉個例子在做離心的時候,如果是離心細胞或者相關成分最好選用無酶和熱原的離心管,而如果只是普通
的液體離心實際上普通離心管即可。
另外這也是很多使用者會產生的問題,就是在向一些商家采購離心管的時候會問該離心管能否重復使用,這個問題實際上要因情況而議,因為離心管在使用過一
次之后就已經在一定程度上被污染了,而且即使進行壓力蒸汽滅菌也無法完全消除這些污染,因此再次使用的話需要看使用者自己對實驗的需求了。
歸根結底,所有的產品都是為實驗者和實驗服務,不能因為產品而影響自己的實驗,而是需要根據自己的實驗去選擇合適的和產品即可。
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